中文名稱：JAK3抑制劑(JAK3-IN-1)

英文名稱：JAK3-IN-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8231

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 CD40 / TNFRSF5 基因全長ORF克隆人P27蛋白(P27)免疫試劑盒進口、分裝

人 ASGPR1 基因全長ORF克隆人P0蛋白抗體(IgM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 Acrp30 基因全長ORF克隆人P0蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷

人 KLK-3 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成抗體(OJ/IleRS)免疫試劑盒進口、組裝

人 Angiopoietin-like3 基因全長ORF克隆人N-乙?；?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDKP)免疫試劑盒進口、分裝

人 CXCL10 基因全長ORF克隆人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(NAG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 KLK-11 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆人N-甲基-D-天冬受體(NMDAR)免疫試劑盒*直銷

人 PSKH1 基因全長ORF克隆人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)免疫試劑盒進口、組裝

人 MASTL / THC2 基因全長ORF克隆人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)免疫試劑盒進口、分裝

人 DYRK4 基因全長ORF克隆人N端前腦鈉素(NT-proBNP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 基因全長ORF克隆人NOD樣受體(NLR)免疫試劑盒*直銷

JAK3抑制劑(JAK3-IN-1)支原體去除試劑(1000×)  1ml  Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent500g 固相內(nèi)毒素清除劑 Surface Endotoxin Erasol 常溫

支原體噴霧劑(即用型)  500mL  1mg 兔肌動蛋白 Actin From Rabbit Muscle 4℃保存

支原體去除試劑3(100X)  4×1.5ml  Antibiotic Solution 3(100X)250mL Sodium Phosphate Buffer（鈉緩沖液）,0.5M,pH7.4  Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.4  常溫保存

支原體去除試劑2(100X)  4×1.5ml  Antibiotic Solution 2(100X)50次 真菌總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 Fungal Total Protein Miniprep Kit 4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存）

支原體去除試劑1(100X)  4×1.5ml  Antibiotic Solution 1(100X)2 ug pSilencer 2.0 pSilencer 2.0 低溫運輸，-20℃保存

PCR支原體檢測試劑盒  10T  PCR Mycoplasma Test Kit1次 96孔板病毒RNAout（離心法） 96 Microwell Plate Vrial RNAOUT 4℃保存

細胞膜破膜劑  150ml  Permeabilization Wash Buffer2 ug pCMV-dR8.91 pCMV-dR8.91 低溫運輸，-20℃保存

細胞膜固定劑  50ml  Cell Membrane Fixation BufferTTC瓊脂基礎 TTC Agar Base 250g

紅細胞裂解液  100mL  Red Blood Cell Lysis Buffer1Mu  G 鉀鹽 Penicillin G K Salt      室溫干燥保存

自噬標志物LC3β(微管關(guān)聯(lián)蛋白)表達載體  96T  肝浸粉 Liver Infusion 100g

自噬檢測試劑盒(熒光顯微鏡，MDC法)  100T  5 mg AICAR （AMPK激活劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)