細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：IGF-IR/InsR和ALK抑制劑（GSK1838705A）

英文名稱：GSK1838705A

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8275

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

人 PROK1 / EG-VEGF 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛脂酰輔A合成免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 P53 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛脂聯(lián)素(ADP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 S100B 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)免疫試劑盒*直銷

人 S100A2 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 S100A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛載脂蛋白B100(Apo-B100)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 CNTN4 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 IL1R8 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒*直銷

人 IL18RAP / IL1R7 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛游離纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 DR6 / TNFRSF21 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛印度刺猬因子(IHH)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 CNTN3 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛乙酰輔A羧化合成(ACC)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 COMP / THBS5 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛乙酰輔A(acetyl-CoA)免疫試劑盒*直銷

IGF-IR/InsR和ALK抑制劑（GSK1838705A）過氧化氫酶測(cè)定試劑盒(紫外法)  100管/96樣  Catalase (CAT) assay kit (Ultraviolet)馬鈴薯葡萄糖瓊脂（USP）平板  9cm*10

細(xì)胞丙二醛測(cè)定試劑盒(微板法)  400T  Cell Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)5g 乙酸－ 1 －萘脂 1-Naphthyl Acetate 室溫保存

總超氧化物歧化酶測(cè)定試劑盒(WST-1法)  48T|96T  Superoxide Dismutase (SOD) assay kit (WST-1 method)50T 破傷風(fēng)芽孢梭菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

植物丙二醛測(cè)定試劑盒(微板法)  48T  Plant Malondialdehyde (MDA) assay kit (Colorimetric method)100 mg DiOC6（3） 化物 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

超氧化物歧化酶分型測(cè)試盒(羥胺法)[測(cè)Cu-Zn、Mn、總]  100管/48樣|50管/24樣  Superoxide Dismutase (SOD) typed assay kit (Hydroxylamine method)250mL Borate Buffer（硼酸鹽緩沖液），0.5M,pH9.5  Borate Buffer，0.5M,pH9.5  常溫保存

微量丙二醛測(cè)定試劑盒(TBA法)  100管/48樣|50管/24樣  Microscale Malondialdehyde (MDA) assay kit (TBA method)5次 97孔板PCR片段純化回收試劑盒（離心法） 96 Microwell Plate PCR Clean-Up Kit 常溫

丙二醛測(cè)定試劑盒(TBA法)  50管/48樣|100管/96樣  Malondialdehyde (MDA) assay kit (TBA method)2 ug pGL2 -basic pGL2 -basic 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

總超氧化物歧化酶測(cè)試盒(羥胺法)  100管/96樣|50管/48樣  Total Superoxide Dismutase (T-SOD) assay kit (Hydroxylamine method)沙氏葡萄糖肉湯（usp） Sabouraud-dextrose Broth 250g

肌酐測(cè)定試劑盒(肌氨酸氧化酶法)(微板法)  96T  Creatinine (Cr) Assay kit ( sarcosine oxidase )1瓶 Hela P10s-11F細(xì)胞株 Hela P10s-11F 低溫運(yùn)輸和保存

甘油含量測(cè)試盒(組織)(微量酶標(biāo)法)  100T  Glycerol Assay Kit李氏增菌肉湯LB2 Listeria Enrichment Broth 10ml*20支/包

類風(fēng)濕因子測(cè)定試劑盒(膠乳增強(qiáng)免疫比濁法)  R1：40ml×1 R2：10ml×1  Rheumatoid factor Assay Kit1瓶 ZR75-1細(xì)胞株 ZR75-1 低溫運(yùn)輸和保存