中文名稱：CFSE/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：500T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6513 CFSE/PI 雙染細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞熒光染料CFSE(CFDA-SE)和PI對細胞進行染色，利用CFSE標記靶細胞，PI標記死的靶細胞來區(qū)分不同的細胞，活的靶細胞成綠色，死的靶細胞成紅色和綠色，從而檢測細胞毒性作用。根據(jù)不同的實驗方案設計，可以用來檢測化合物的細胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細胞或NK 細胞介導的細胞毒作用。 CFDA-SE 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞。CFDASE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料，可以結(jié)合細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。CFDASE在結(jié)構(gòu)上將酚羥基部位改造成AM體，所以自身不發(fā)熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，進入細胞內(nèi)的CFDASE的AM 部位能被細胞內(nèi)酯酶水解生成CFSE，通過共價結(jié)合賴側(cè)鏈的氨基而摻入細胞內(nèi)和細胞表面的蛋白，且結(jié)合后發(fā)出強的綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部位結(jié)合，固定在細胞內(nèi)，不會漏出細胞外。CFSE進入細胞后定位于細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核，在細胞核的熒光強。 CFSE毒性小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準確和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù)。 CFSE/PI標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞毒性檢測。 CFSE標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為516nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。PI標記細胞呈紅色熒光，流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為647nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL2 detection channel。 CFSE標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞毒性外，還可單染后用于細胞增殖檢測，或者用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。 儲存條件：CFSE探針-20℃避光保存；溶解液-20℃保存；PI染色液2-8℃避光保存。 有效期：六個月。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Proteus vulgaris普通變形桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Folium isatidis 大青葉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Legionella spp. 軍團屬通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix scrophulariae玄參LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Babesia equi馬巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Blastomyces dermatitidis皮炎芽生LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)小反芻獸疫病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Yellow-Head Baculovirus(YBV)黃頭桿狀病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Salmonella typhimurium鼠傷寒沙門氏探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Ostertagia spp.奧斯特線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Equine Rhinitis Virus馬鼻炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rickettsia tsutsugamushi羌蟲病立克次氏體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 CFSE/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒兔子表皮生長因子(EGF)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 人異鎖鏈素(IDES)免疫試劑盒*直銷 大鼠KI-67 免疫試劑盒*直銷 人嗜肺軍團菌抗原(LP Ag)免疫試劑盒進口、組裝 無菌生理鹽水管（內(nèi)附采樣棉簽） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20支/包 人可溶性補體激活產(chǎn)物SC5b9 免疫試劑盒進口、分裝 改良CCD瓊脂基礎(mCCD) 英文名稱：CCDA Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人核黃素激(RFK)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 季銨鹽類中和劑管（帶棉簽） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20 人胞外超氧化物歧化(SOD3)免疫試劑盒*直銷 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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