操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 中文名稱:高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:30T 產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X6660 G01高爾基體染色試劑盒是利用G系列探針進(jìn)行細(xì)胞高爾基體特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的G01高爾基體染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針,具有465/535nm的大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。 G系列探針是對(duì)活細(xì)胞的高爾基體進(jìn)行選擇性染色的一類熒光染料,該系列探針可以選擇性標(biāo)記高爾基體,當(dāng)與高爾基體結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng),被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光,具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。 以96孔板每孔200μl染色液計(jì),本試劑盒小包裝可以染色50個(gè)樣本。 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存。 有效期:6個(gè)月。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 50次 柱式毛發(fā)DNAout Column Hair DNAOUT 常溫保存(蛋白K溶液需要-20℃保存) 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Immunoglobulin G 100次 凝固血液DNAout Blood Clot DNAOUT 常溫O/F培養(yǎng)基(HLGB) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)O/F Medium用于鑒別弧菌葡萄糖代謝類型(發(fā)酵型或氧化型)(SN標(biāo)準(zhǔn))250 2 ug pCAGGS pCAGGS 低溫運(yùn)輸,-20℃保存四號(hào)瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)4 Agar Base250克霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng) 2 ug pUG35 pUG35 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人神經(jīng)粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)ELISA試劑盒 2 ug pSUPER-puro pSUPER-puro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Baculoviral IAP repeat-containing protein 2 含225ml7.5%氯化鈉肉湯均質(zhì)袋 7.5% NaCl Broth 10個(gè)/包 1.56-100 ng/mL 人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG-1)ELISA試劑盒 2 ug pPAmCherry-Tubulin pPAmCherry-Tubulin 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 500mL TBS-Tween-20 (TTBS),20X,pH7.6 TBS-Tween-20 (TTBS),20X,pH7.6 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Dihydropteridine reductase 1瓶 Tca-8113株 Tca-8113 低溫運(yùn)輸和保存NZCYM肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)NZCYM Broth100克BR 10mg 化丙啶干粉 PI Powder -20℃干燥避光保存 10mL RNA溶解液 常溫 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Neuromedin-U 高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒人髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 獼猴骨特異性堿性B(ALP-B)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人李斯特菌抗體(IgM)免疫試劑盒*直銷 霉菌培養(yǎng)基(含瓊脂和氯) 英文名稱:Fungal Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人饑餓激素(GHRL)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 青敏感紙片 英文名稱:Penicillin-sensitive paper 產(chǎn)品規(guī)格:20片 人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 木犀草苷 : CAS:5373-11-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢 人B細(xì)胞淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)免疫試劑盒*直銷 牛核心蛋白聚糖(DCN)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 |