細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液(計(jì)數(shù)液)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6721

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

Measles Virus麻疹病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周FOXO1 + FOXO3 + FOXO4  叉蛋白O1/O3/O4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Herba polygoni avicularis萹蓄探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Ret/HSCR1  原基因酪蛋白激受體RET/多發(fā)性內(nèi)分泌瘤和甲狀髓樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlTAGL2/TAGLN2  細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml

Avian Rotavirus(ARV)禽輪狀病毒RT-LAMP試劑盒（停） 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周FADS1  脂肪酸去飽和1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MAPK14(Thr180)  磷酸化p38MAPK抗體 規(guī)格: 0.1ml

Paenibacillus larvae幼蟲芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CD158i  NK細(xì)胞抑制性受體2DS4抗體 規(guī)格: 0.2mlARSK  芳香基硫酸酯K抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix ophiopogonis麥冬LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2  規(guī)格: 0.1mlPhospho-MAPKAPK2(Thr334)  磷酸化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Human Coronavirus(HCoV-229E)人229E RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PHGDH  磷酸甘油酸脫抗體 0.2mlphospho-GABBR2 (Ser892)   磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mycoplasma pneumoniae肺炎支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周CCL12/MCP5  單核細(xì)胞趨化蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2mlWNK3 protein  絲/蘇激家族成員的基因WNK3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Cotton Leaf Crumple Virus(CLCrV)棉花皺葉病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周NLRP10  富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2mlRNF170  環(huán)指蛋白170抗體 規(guī)格: 0.2ml

Influenza Virus A N1（AIV-N1）甲型流感（）病毒N1亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-Histone H1.4(Thr18)  磷酸化組蛋白H1.4抗體 規(guī)格: 0.1mlPlastin L  淋巴細(xì)胞胞漿蛋白LCP1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Heterakis isolonche自然感染雉異刺線蟲LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Cyclin A1  周期素A1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-FANCD2(Ser222)  磷酸化FANCD2抗體 規(guī)格: 0.1ml

嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液(計(jì)數(shù)液)人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

犬胰蛋白原激活肽(TAP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠心肌肌球蛋白重鏈(MHC)自身抗體免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

綿羊基質(zhì)金屬蛋白3(MMP3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)免疫試劑盒*直銷

大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒*直銷

兔子血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠白三烯E4(LTE4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝