運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) =計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線。
綿羊重組激活基因1(RAG-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊血管緊張素III(ANG III)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶θ1(GSTθ1/GSTt1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊周期素依賴性激酶抑制因子3(CDKN3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊補(bǔ)體成分4a(C4a)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊不均一核糖核蛋白A2/B1 (HNRPA2B1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子(AATF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊基質(zhì)金屬蛋白酶25(MMP-25)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊周期素依賴性激酶1(CDK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

綿羊血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

綿羊角膜蛋白(KERA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

ME-180(人子宮頸表皮癌細(xì)胞)規(guī)格P21/CDKN1A  p21蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlChondroitin Sulfate  硫酸軟骨素抗體 規(guī)格: 0.2ml

SMMHC/Myosin  平滑肌肌球蛋白重鏈抗體 規(guī)格: 0.1mlGLT8D2  糖基轉(zhuǎn)移酶GLT8D2抗體 規(guī)格: 0.2ml

WNT2  信號通路Wnt2抗體 規(guī)格: 0.2mlMYF5  生肌決定因子Myf5抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-Ephrin B(Tyr316)  磷酸化Ephrin B抗體 規(guī)格: 0.1mlET-1  內(nèi)皮素-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

SOX22  核轉(zhuǎn)錄因子SOX22抗體 規(guī)格: 0.2mlCCR-2B  細(xì)胞表面趨化因子受體2B抗體 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1mlTRPM7  瞬時受體電位離子通道蛋白7抗體（M亞家族） 規(guī)格: 0.2ml

CTAGE6  CTAGE6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlNDRG4  抑基因NDRG4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Connexin-40  間隙連接蛋白40抗體 規(guī)格: 0.1ml5 MethylCytosine  5甲基胞嘧啶抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-MK IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1mlANKS1A  錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白1A抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fumarate hydratase/FH  富馬酸水合酶抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-CHK2 (Thr387)  磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml

WISP1  Wnt1信號通路蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlARF6  ADP核糖基化因子6抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Guinea pig IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

ELAC2  遺傳性前列蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

MCSF Receptor  巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。