操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：ERK5抑制劑(ERK5-IN-1)

英文名稱：ERK5-IN-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8054

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

人 PNMT 基因全長(zhǎng)ORF克隆人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 SCYL3 基因全長(zhǎng)ORF克隆人血管緊張素1-7(Ang1-7)免疫試劑盒*直銷

人 PPP1R14D 基因全長(zhǎng)ORF克隆人血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 LPAL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人血管動(dòng)蛋白(AMOT)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 PAN2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人旋毛蟲(chóng)抗體(Trichinella Ab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 UBASH3B 基因全長(zhǎng)ORF克隆人溴脫氧核苷(BrdU)免疫試劑盒*直銷

人 EIF4B 基因全長(zhǎng)ORF克隆人雄烯二酮(ASD)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 MSN 基因全長(zhǎng)ORF克隆人雄烯二醇免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 DES 基因全長(zhǎng)ORF克隆人雄激素受體(AR)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PPP5C 基因全長(zhǎng)ORF克隆人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)免疫試劑盒*直銷

人 SELPLG 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)人(TP-5)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

ERK5抑制劑(ERK5-IN-1)PGI2受體激動(dòng)劑(NS-304)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  NS-304梭菌強(qiáng)化培養(yǎng)基 Reinforced medium for clostridia 250g

FXa抑制劑（Edoxaban tosylate monohydrate）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Edoxaban tosylate monohydrate30µg 人培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA Human Culture Cell Genomic DNA  4℃保存

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（Moexipril hydrochloride）  1mL(10mM)|50mg|100mg  Moexipril hydrochloride250mL MES Buffer,1.0M,pH9.0   MES Buffer,1.0M,pH9.0   常溫保存

ACE抑制劑（Zofenopril calcium）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Zofenopril calcium100次 植物種屬鑒定PCR Mix 9（質(zhì)體 trnH-psbA） Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

Na+/H+交換抑制劑(Cariporide)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Cariporide2 ug pMAL-p5X pMAL-p5X 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

脂肪酸代謝抑制劑（Trimetazidine dihydrochloride）  1mL(10mM)|10mg|50mg  Trimetazidine dihydrochlorideAHM鑒別培養(yǎng)基 AHM Medium 250g

環(huán)氧合酶(COX)抑制劑（Nitroflurbiprofen）  1mg  Nitroflurbiprofen1瓶 RKO-E6細(xì)胞株 RKO-E6 低溫運(yùn)輸和保存

SK channel抑制劑（ICA）  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg  ICA革蘭氏陽(yáng)性菌增菌液 Gram Positive Bacteria Enrichment Broth 250g

烷基胺Renin抑制劑（VTP-27999 Hydrochloride）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  VTP-27999 Hydrochloride1g 3,3’- 二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸 DAB HCl -20℃保存

PDE III抑制劑（Revizinone）  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  RevizinoneElek氏培養(yǎng)基 Elek Medium 250g

IIA型人重組sPLA2和兔重組cPLA2抑制劑（Tanshinone I）  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg  Tanshinone I30次 一站式CTAB-PAGE電泳套裝