培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務,若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | MDBK(牛腎細胞) | MDBK (bovine kidney cell) | 5×106cells |
產品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 大鼠白介素2受體β(IL-2Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠蛋白酶原A(PGA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠蛋白酶原G(PGG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠I型前膠原氨基端原肽(PINP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 ELI#7 大鼠氨基端前心腦鈉肽(NT-pro-ANP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠反三甲腺原氨酸(rT3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠組織轉谷氨酰胺酶(TGM2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠11-去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠線粒體超氧化物歧化酶2(SOD2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠胞外超氧化物歧化酶3(SOD3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠銅伴侶超氧化物歧化酶4(SOD4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠血管緊張素I(ANG I)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 MDBK(牛腎細胞)Rabbit anti-MG IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml Phospho-Smad2(Ser245/250/255) 磷酸化細胞信號轉導分子SMAD2抗體 規(guī)格: 0.1ml LASS5 壽相關基因lASS5抗體 規(guī)格: 0.2ml MIS12 染色體及有絲分裂蛋白MIS12抗體 規(guī)格: 0.2ml Bone Alkaline Phosphatase/AKP2 骨堿性磷酸酶抗體 規(guī)格: 0.2ml FAS/Apo-1/CD95 載脂蛋白A1抗體 規(guī)格: 0.1ml BTBD6 BTBD6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml KCNA7 鉀電壓閥門通道混合器相關亞家族成員7抗體 規(guī)格: 0.1ml NDUFS4 線粒體復合物NDUFS4蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml CHCHD5 卷曲螺旋結構域蛋白CHCHD5抗體 規(guī)格: 0.2ml AIFM3 凋亡誘導因子3抗體 規(guī)格: 0.2ml HCG/LH/FSH/TSH alpha 人絨毛膜促性激素α亞基抗體(Cg A) 規(guī)格: 0.1ml CCL24 嗜酸粒細胞趨化蛋白24抗體 規(guī)格: 0.2ml Goat Anti-rabbit IgG/FITC FITC標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.3ml |