中文名稱：鐵誘導(dǎo)細(xì)胞死亡激活劑

英文名稱：Erastin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7113

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Radix glycyrrhizae preparata灸甘草染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周procollagen type IIA  Ⅱ型膠原α1抗體 規(guī)格: 0.2mlDDB1  DNA損傷結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Germiston Virus杰米斯頓病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy5  Cy5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlSkp2/skp2 p45  細(xì)胞S期激相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Epidemic Encephalitis B乙型腦炎（乙腦）病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.3mlphospho-HRH1(Ser398)  磷酸化組胺受體H1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Fructus cannabis火麻仁LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周TRAF1  瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗體 規(guī)格: 0.2mlDog IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1ml

Proteus penneri彭氏變形LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ANKRD50  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-Goat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

Madurella mycetomatis足馬杜拉分枝探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周NUDC  細(xì)胞核分離基因C蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-FGFR1 (Tyr307)  磷酸化堿性成纖維細(xì)胞生因子受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Brome Streak Mosaic Virus(BStMV)雀麥草條紋花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周HRH3/GPCR97  組織胺H3受體抗體 規(guī)格: 0.1mlPCDHB4  原鈣粘蛋白β4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Canine Influenza Virus H1N1（CIV-H1N1）犬流感病毒H1N1型LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-cdc25A (Ser178)  磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 規(guī)格: 0.1ml

Bovine Norovirus(BoNoV)牛諾如病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-rat IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Theileria lowenshuni呂氏泰勒蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周WEE1 protein  WEE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

鐵誘導(dǎo)細(xì)胞死亡激活劑豬端粒(TE)免疫試劑盒*直銷

牛孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠Ⅰ(FⅠ)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

雞磷酯Cγ鏈(PLCγ1)免疫試劑盒*直銷

小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠腺病毒抗體(FL/K87-Ab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

兔一氧化氮合成(NOS)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠活化蛋白C(APC)免疫試劑盒*直銷

人一氧化氮(NO)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人三角形四肽重復(fù)蛋白1(TTC1/TPR1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)