培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

500mL Krebs-Ringer Solution [Bicarbonate Buffered; w/o Ca++]  Krebs-Ringer Solution [Bicarbonate Buffered; w/o Ca++]  常溫保存氯化鈉B肉湯基礎(SCPB)    進口、國產(chǎn)Sodium Chloride Polymyxin Broth Base用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)，用前應無菌加入B（SN標準）250

5 g  蛋白去除試劑M Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ryanodine receptor 1

50T 嗜水氣單胞菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Melanoma-associated antigen C1

250mL HEPES Buffer,1M,pH7.6  HEPES Buffer,1M,pH7.6  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人蛋白激JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2)ELISA試劑盒

250mL Casein Blocking Buffer in PBS（酪蛋白封堵劑）  Casein Blocking Buffer in PBS 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Mannose-binding protein C

根瘤菌培養(yǎng)基  250g 0.94-60 ng/mL 人外基質(zhì)糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒

25mL Bovine Serum Albumin Solution（BSA溶液），1mg/mL Bovine Serum Albumin Solution，1mg/mL 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement C4-B

25g 咪唑 Imidazole 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 26

結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板（9cm） Violet Red Bile Agar 10個/包結晶紫中性紅膽鹽瓊脂進口、國產(chǎn)VRBA250克用于大腸菌群的檢驗

30次 一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE套裝（低pH 緩沖液套） One-Stop Protein Native PAGE Pack 常溫保存（上樣液需要-20℃保存） 0.156-10 ng/mL 人甘露聚糖結合凝集素相關蛋白2(MASP2)ELISA試劑盒

2 ug pCMV/Myc/Mito pCMV/Myc/Mito 低溫運輸，-20℃保存SE增菌液進口、國產(chǎn)Selenite Enrichment Medium250克增殖標本中的沙門氏菌

巴氏染色液(EA36)雞天門冬氨基轉移(AST)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

小鼠白介素1受體相關激1(IRAK1)免疫試劑盒進口、分裝

大鼠血管生成素1(ANG-1)免疫試劑盒進口、分裝

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒進口、組裝

大鼠甲狀旁腺激素(PTH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人胰抑制素(Pancreastatin)免疫試劑盒*直銷

大鼠c-jun 免疫試劑盒*直銷

人神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒進口、組裝

革蘭氏染色液 英文名稱：Gram Staining 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*8

人柯薩奇病毒A16(CVA16)抗體(IgG)免疫試劑盒進口、分裝

木糖-明膠培養(yǎng)基 英文名稱：Xylose - gelatin medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g