儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 產(chǎn)品名稱 | 百日咳波氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bordetella pertussis | 貨號 | BJ-R6449 |
產(chǎn)品特點: 1. 百日咳波氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增; 2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘; 3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。 在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。 特異性熒光標(biāo)記: TaqMan法 TaqMan探針的特性: (1)5′端標(biāo)記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等 (2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q) (3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光 (4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針 相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量: 內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。 檢測步驟: 一、 試劑的準(zhǔn)備 從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。 設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表: 試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量 熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 總量 15 µL N×15µL (1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。 7.2 qPCR反應(yīng)條件 將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。 推薦循環(huán)條件: 1循環(huán) 50℃ for 2 min 預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec 在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 PCR實驗步驟 典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是: 將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈; 人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短; 耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。 以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品: 組織羥賴氨酸(HYL)含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 細(xì)胞免疫熒光顯微鏡間接檢測試劑盒(含熒光二抗) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測定試劑盒(單線態(tài)氧氣) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 細(xì)菌脯氨酸肽酶(prolidase;PLD)克林納(Chinard)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 石蠟切片組織蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次 DMEM*培養(yǎng)(無抗生素) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升 體羥脯氨酸(HYP)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 MAPK(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:100微克 載玻片細(xì)胞TNF BETA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次 植物組織可溶性總核蛋白高純制備試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次 體還原型谷胱甘肽(GSH)濃度高效相色譜定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次 純化溶酶體功能中性紅檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 百日咳波氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒2,4-二-6-乙嘧分子式:138.1704英文名稱:2,4- two amino -6- ethyl:514854-12-7分子量: C6H10N4 草酸分子式:306.32英文名稱:Phenylhydrazine oxalate:37887-33-5分子量: C14H18N4O4 頭孢羥氨芐英文名稱:Cefadroxil分子式:363.39分子量:C16H17N3O5S:66592-87-8 6-METHOXY-2-OXO-1,2,3,4-TETRAHYDROQUINOLINE-4-CARBOXYLICACID英文名稱:ACID 6-METHOXY-2-OXO-1,2,3,4-TETRAHYDROQUINOLINE-4-CARBOXYLIC分子式:分子量: C11H11NO4:959237-42-4 2-(4-BOC-PIPERAZINYL)-2-(2-TRIFLUOROMETHYL-PHENYL)ACETICACID英文名稱:2- (4-BOC-PIPERAZINYL) -2- (2-TRIFLUOROMETHYL-PHENYL) ACID ACETIC分子式:388.38分子量: C18H23F3N2O4:885274-23-7 羅卡因英文名稱:Ropivacaine分子式:274.4分子量: C17H26N2O:84057-95-4 5-芐硫四氮唑分子式:192.24英文名稱:5- benzylthio tetrazoline:21871-47-6分子量: C3H6N4S 1-CBZ-4--分子式:248.32英文名稱:1-CBZ-4- amino piperidine:157023-34-2分子量: C14H20N2O2 四溴甲分子式:449.8英文名稱:Four bromine toluene:15442-91-8分子量: C10H10Br4 4-丁啉分子式:143.23英文名稱:4- butyl morpholine:1005-67-0分子量: C8H17NO 2-氯乙砜分子式:204.67英文名稱:2- ethyl phenyl group:938-09-0分子量: C8H9ClO2S |