實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 平尾毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

冰凍切片免疫組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

蛋白酶抑制劑混合 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：保留細(xì)胞內(nèi)成分活性A、 動(dòng)物細(xì)胞B、 細(xì)菌C、 酵母菌D、 植物

石蠟切片組織NF KAPPA B P50蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

免疫細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP*間接檢測試劑盒（含一抗和AP二抗） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

細(xì)胞誘導(dǎo)型巨噬細(xì)胞合成酶（iNOS /NOS2/mNOS）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞RSE激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

Cr. Neoformans RFLP基因分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞西尼羅病毒蛋白酶（WVV  PROTEASE）活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織MUSK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)菌β-內(nèi)酶報(bào)告基因活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

高效相色譜（HPLC）分析 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20樣本

細(xì)胞JAK3激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

平尾毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒2-氯-3-硝-5-(三氟甲)吡分子式：226.54英文名稱：2- -3- nitro -5- (three f) pyridine：72587-15-6分子量： C6H2ClF3N2O2

異丁司特分子式：230.31英文名稱：The special：50847-11-5分子量： C14H18N2O

2-乙酰-3-溴-5-甲吡分子式：229.07英文名稱：2- acetyl -3- -5-：142404-83-9分子量： C8H9BrN2O

非洛地平分子式：384.25英文名稱：Felodipine：72509-76-3分子量： C18H19Cl2NO4

間硝三氟甲分子式：191.11英文名稱：Three fluorine toluene：98-46-4分子量： C7H4F3NO2

1-正丁-4-[(4-乙氧)乙炔]分子式：278.39英文名稱：1- butyl -4-[(4-) - phenyl group：85583-83-1分子量： C20H22O

2,5-二氯-3-(二氟甲)吡分子式：197.998英文名稱：2,5- two -3- (two Fu Jiaji) pyridine：71701-93-4分子量： C6H3Cl2F2N

1,4-二(溴甲)-2-甲氧-5-(2-乙己氧)分子式：422.2英文名稱：1,4- two (Xiu Jiaji) -2-, -5- (2-), benzene：209625-37-6分子量： C17H26Br2O2

4-溴-5--1H-1,2,3-三唑分子式：224英文名稱：4- -5- three：21505-14-6分子量： C8H6BrN3

鄰溴分子式：282.9英文名稱：O-iodine Bromophenyl：583-55-1分子量： C6H4BrI

4-(6-氯-3-噠嗪)啉分子式：199.64英文名稱：4- (6- -3-) Ma Lan：17259-32-4分子量： C8H10ClN3O