產(chǎn)品特點(diǎn): 1. 牛皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增; 2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘; 3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。 在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。 特異性熒光標(biāo)記: TaqMan法 TaqMan探針的特性: (1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等 (2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q) (3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光 (4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針 相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量: 內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 產(chǎn)品名稱 | 牛皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Hepervirus 2 (BHV-2)2 | 貨號 | BJ-R6463 |
檢測步驟: 一、 試劑的準(zhǔn)備 從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。 設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表: 試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量 熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 總量 15 µL N×15µL (1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。 7.2 qPCR反應(yīng)條件 將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。 推薦循環(huán)條件: 1循環(huán) 50℃ for 2 min 預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec 在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 PCR實(shí)驗(yàn)步驟 典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是: 將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫 FRUORESCAMINE蛋白質(zhì)濃度熒光定量試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:100次 溴酚藍(lán)(BROMPHENOL BLUE)溶(100毫克/毫升) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10毫升 冰凍切片組織鈣ATP酶PMCA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次 植物總糖蛋白樹脂法純化試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:5次 體HPV7(HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7)病毒定性檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 通用型丁酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 石蠟切片組織組蛋白熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次 石蠟切片磷脂尼羅紅(Nile Red)直接熒光染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次 食物果膠生物酶比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 血酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 動物源性食品雞源基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次 組織肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:25次 牛皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒丁氯吡分子式:171.66英文名稱:Ding Ji chloride:1124-64-7分子量: C9H14ClN (R)-(-)-4-(N,N-二甲磺酰)-7-(3-異硫吡咯烷-1-)并呋咱分子式:353.42英文名稱:(R)-(-)- 4 -(N,N-二甲磺酰)- 7 -(3 -異硫吡咯烷- 1 -)并呋咱:163927-31-9分子量: C13H15N5O3S2 2-溴-1,3,5-*分子式:199.09英文名稱:2- three methyl bromide -1,3,5-:576-83-0分子量: C9H11Br 2-糠硫噻唑分子式:英文名稱:2糠硫噻唑:分子量: 2-巰-4-吡噻唑分子式:194.28英文名稱:2- mercapto -4- pyridyl thiazole:77168-63-9分子量: C8H6N2S2 N-Boc-4-羥分子式:201.26英文名稱:N-Boc-4- piperidine:109384-19-2分子量: C10H19NO3 3,5-二甲吡分子式:107.15英文名稱:3,5- two methyl pyridine:591-22-0分子量: C7H9N 漢防己乙素英文名稱:Fangchinoline分子式:608.7233分子量:C37H40N2O6:436-77-1 西洛他唑分子式:369.46英文名稱:Cilostazol:73963-72-1分子量: C20H27N5O2 雷公藤紅素英文名稱:Red pigment分子式:450.61分子量: C29H38O4:34157-83-0 2-溴-4-甲吡分子式:172.02英文名稱:2- -4- methyl pyridine:4926-28-7分子量: C6H6BrN 2 |