實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點：
1. 棒桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應(yīng)重復性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量：
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

10X通用型非變性裂解 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：適合各種細胞native蛋白

細胞乙醇脫氫酶III（S-亞谷胱苷肽還原酶）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細胞IGF 蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

 茶水氟元素比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織基質(zhì)金屬蛋白酶 125I同位素標記檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

載玻片細胞EGFR 蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

通用型總淀粉化學比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

免疫印跡超敏型HRP－TMB底物顯色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

蜂蜜木糖醇比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

載玻片細胞CASPASE-3蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

寡核苷酸探針非同位素AP－BCIP/NBT法DNA南方雜交*試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

棒桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒3-氟-2-甲吡分子式：111.1英文名稱：3- -2- methyl pyridine：15931-15-4分子量： C6H6FN

1-甲酰咪唑分子式：96.09英文名稱：1- a：3197-61-3分子量： C4H4N2O

聚砜分子式：1327.58英文名稱：Polysulfone：25135-51-7分子量： C81H66O12S3X2

*鋁分子式：72.09英文名稱：Three methyl aluminium：75-24-1分子量： C3H9Al

5-喹啉分子式：145.16英文名稱：5-, the alcohol：578-67-6分子量： C9H7NO

環(huán)戊英文名稱：Loop e分子式：68.12分子量： C5H8：142-29-0

甲環(huán)戊英文名稱：Methyl group分子式：82.14分子量： C6H10：693-89-0

L-丙氨叔丁酯英文名稱：L- alanine tert butyl ester hydrochloride分子式：181.66分子量： C7H15NO2·HCl：13404-22-3

番瀉苷D英文名稱：The D分子式：848.77分子量：C42H40O19：37271-17-3

酒石酸氫鉀分子式：188.18英文名稱：Potassium hydrogen：868-14-4分子量： C4H5KO6

2,3-雙(4-硝)-5-四氮唑氯水合物分子式：424.8英文名稱：2,3- - (4- nitrophenyl) -5- phenyl tetrazole chloride hydrate：69231-13-6分子量： C19H13ClN6O4·xH2O