實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。

特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)庫(kù)庫(kù)蠓通用保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件：-20℃以下，有效期12個(gè)月。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

細(xì)胞過(guò)氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

CASPASE-6蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：25次

組織冠狀病毒3C類蛋白酶（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性熒光淬滅法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細(xì)胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

組織MET激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)胞β-內(nèi)酶報(bào)告基因活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

真菌/酵母磷脂酶D1（Phospholipase D1）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

聚糖二氨基亞甲基二氧基苯（DMB）熒光標(biāo)記試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

小量微藻菌基因組DNA萃取試劑盒（高多糖/酚） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次

血α－淀粉酶活性CNPG3比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

Schenk & Hildebrandt基礎(chǔ)培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：500毫升溶/片劑

冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次

庫(kù)蠓通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒5-氟-2-硝三氟甲分子式：209.1英文名稱：5- -2- nitro three：393-09-9分子量： C7H3F4NO2

N-乙-3-甲酸乙酯分子式：英文名稱：N- -3- ethyl nipecotate：分子量：

千層紙素A英文名稱：Thousand layer of paper A分子式：284.263分子量：C16H12O5：480-11-5

間甲酚紫英文名稱：M-cresol purple分子式：382.11分子量： C21H18O5S：147200

醋諾孕酮英文名稱：Vinyl acetate分子式：370.48分子量： C23H30O4：7759-35-5

2,6-二氟硝分子式：159.09英文名稱：2,6- two：19064-24-5分子量： C6H3F2NO2

雪上一枝蒿乙素英文名稱：Bullatine B分子式：437.56956分子量：C24H39NO6：466-26-2

1,4-雙(二氟甲)分子式：178.12英文名稱：1,4- bis (two f) benzene：369-54-0分子量： C8H6F4

α,α'-雙(4-)-1,4-二異丙分子式：344.5英文名稱：Alpha, alpha '- bis (4- amino phenyl) -1,4- two isopropyl benzene：298313分子量： C24H28N2

碳酸鉀分子式：138.2英文名稱：Potassium carbonate：584-08-7分子量： K2CO3

潑尼松龍環(huán)氧英文名稱：Prednisolone epoxy分子式：358.43分子量： C21H26O5：1896101