實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點：
1. 差異脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量：
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

血堿英文名稱：Sanguinarine分子式：332.32946分子量：C20H14NO4+：2447-54-3

1-乙-4-[(4-正丙烷)乙炔]分子式：248.36英文名稱：1- ethyl -4-[(4- phenyl group) acetylene group：102225-55-8分子量： C19H20

聚對二甲分子式：英文名稱：Parylene：分子量：

1,1'-二庚-4,4'-二溴聯(lián)吡鎓分子式：514.39英文名稱：1,1'- two -4,4'- heptyl bromide with pyridinium：1555692分子量： C24H38Br2N2

乙二胺四乙酸二鉀分子式：372.24英文名稱：Two potassium EDTA：2001-94-7分子量： C10H14K2N2O8#

延齡草苷英文名稱：Trillin分子式：576.7658分子量：C33H52O8：14144-06-0

2,6-二[(4S)-4--2-惡唑啉]吡分子式：369.42英文名稱：2,6- two [(4S) -4- phenyl -2- oxazolinyl pyridine]：174500-20-0分子量： C23H19N3O2

牡荊素-2-O-李糖苷英文名稱：Vitexin rhamnoside -2-O-分子式：578.52分子量：C27H30O14：64820-99-1

4,4-亞二聯(lián)分子式：321.41英文名稱：4,4- subunit two：102113-98-4分子量： C24H19N

4-(3-溴)啉分子式：242.11英文名稱：4- (3-) Ma Lan：197846-82-5分子量： C10H12BrNO

2-氟-5-甲酰三氟硼酸鉀分子式：英文名稱：2- fluorine -5- Formylphenyl kbf4 three：1012868-70-0分子量： C7H4BF4KO

差異脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒X光膠片100張國產(chǎn)

Bolton肉湯配套試劑 規(guī)格： 10支/盒 用途： 每支添加于100mL的 Bolton 肉湯基礎(chǔ)中

消化桿菌 Lactobacillus alimentarius中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii

P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)5×106cells/瓶×2gersion

小鼠脂肪細胞英文名稱：3T3 L1

檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti

Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜細胞系

小鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞*培養(yǎng)基ACCC40177 Nocardiopsis dassonvillei

科瑪嘉ECC顯色培養(yǎng)基 規(guī)格： 1000ml/瓶 用途： 用于大腸桿菌和大腸菌群的鑒定和計數(shù)

香菇 Lentinula edodes

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2