凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1 ml) 計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細(xì)胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲(chǔ)存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機(jī)中,再放入液氮槽中。程序?yàn)? program 7: HB CELL 。 本公司代理ATCC細(xì)胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價(jià)格信息,請(qǐng)咨詢?cè)诰€客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 16HBE(人支氣管上皮樣細(xì)胞) | 16HBE (human bronchial epithelial cells) | 5×106cells |
產(chǎn)品特點(diǎn): 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時(shí),背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細(xì)胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時(shí)的注意事項(xiàng): 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。 4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細(xì)胞濃度不要太高,某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。 4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時(shí),亦應(yīng)作一個(gè)backup culture,以防止冷凍失敗。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 人硒蛋白1(SEP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SEP1 (Selenoprotein 1) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶23B(MMP23B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human MMP23B (Matrix Metalloproteinase 23B) ELISA Kit 人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CAPA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CAPA (Cytotoxin Associated Protein A) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白13(CK-13/KRT13)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CK-13/KRT13 (Cytokeratin 13) ELISA Kit 人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CTLA4 (Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白17(CK17/KRT17)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CK-17/KRT17 (Cytokeratin 17) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白18(CK-18/KRT18)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CK-18/KRT18 (Cytokeratin 18) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白18-M65(CK18-M65)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CK18-M65 (Cytokeratin 18-M65) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白19(CK-19/KRT19)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CK-19/KRT19 (Cytokeratin 19) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白20(CK20/KRT20)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CK-20/KRT20 (Cytokeratin 20) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CYFRA21-1 (Cytokeratin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit 人細(xì)胞絨毛蛋白(CVL/EZR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CVL/EZR (Cytovillin/Ezrin) ELISA Kit 人細(xì)胞色素b-561(CYB561)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CYB561 (Cytochrome b-561) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CYP7A1 (Cytochrome P450 7A1) ELISA Kit 16HBE(人支氣管上皮樣細(xì)胞)歐前胡素 CAS 482-44-0 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 (+)-兒茶素 CAS 規(guī)格: HPLC≥98%,10mg/支 訂購|咨詢 桑色素;桑黃素 CAS 規(guī)格: HPLC≥98%,1g/支 訂購|咨詢 大黃酚;大黃根酸 CAS 481-74-3 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 延齡草苷; 地索苷; 延年草甙 CAS 14144-06-0 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 鼠尾草酚: 鼠尾草苦內(nèi)脂 CAS 5957-80-2 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 三白草 CAS 177931-17-8 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 白芷 對(duì)照品 CAS 規(guī)格: 1g 訂購|咨詢 甲萘醌(維生素K3)對(duì)照品 CAS 規(guī)格: 100mg;99.3% 訂購|咨詢 多拉菌素 對(duì)照品 CAS 規(guī)格: 0.1g;95.6% 訂購|咨詢 戊型肝炎病IgG抗體國家參考品 CAS 規(guī)格: 36支/套 訂購|咨詢 植酸鈣;Calcium phytate CAS 3615-82-5 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 乙酰天素;Acegastrodine CAS 64291-41-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 蕓苔素內(nèi)酯;Brassilide CAS 72962-43-7 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 |