培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中，脾臟置于篩網上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) =計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d，繪制細胞生長曲線。

兔粘蛋白20(MUC20)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔胰淀素(IAPP)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔脫氫表雄酮S7(DHEA-S7)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔脂肪酸結合蛋白1(FABP1)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔轉錄激活因子7(ATF7)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔肝細胞生長因子(HGF)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔性別決定區(qū)Y框蛋白3(SOX3)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔表面膜免疫球蛋白A(mIgA)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔增殖相關蛋白2G4 (PA2G4)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔半胱氨酰白三烯受體2(CYSLTR2)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD326)酶聯免疫吸附測定試劑盒  

兔蛋白酪氨酸磷酸酶受體J(PTPRJ)酶聯免疫吸附測定試劑盒

兔蛋白激酶C-θ(PKCθ)酶聯免疫吸附測定試劑盒

腹膜毛細血管內皮細胞FMDV Polyprotein (3A protein)   口蹄疫病毒A型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MAPK14(Tyr323)  磷酸化p38MAPK抗體 規(guī)格: 0.1ml

TET1/CXXC6  Ten-eleven轉運基因1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlNRP1/CD304  神經纖毛蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

MIP4/CCL18  巨噬細胞炎癥蛋白18抗體 規(guī)格: 0.1mlDNase gamma  脫氧核糖核酸酶γ抗體 規(guī)格: 0.2ml

MRF/C11orf9  髓鞘基因調控因子抗體 規(guī)格: 0.2mlMYBBP1A/p53 activated protein 2  p53激活蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-Mouse IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Avidin  兔抗親和素 規(guī)格: 1mg

PGF2 α  前列素F2a抗體 規(guī)格: 0.2mlalpha 2 Macroglobulin  α2巨球蛋白(α-2M)抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-KLF5(Ser275)  磷酸化KLF5抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/PE  PE標記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

SFR19  剪接因子，氨酸/絲氨酸豐富19 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SATB1 (Ser47)  磷酸化核基質結合區(qū)結合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

APOC2  載脂蛋白C2抗體 規(guī)格: 0.1mlAPEX2  嘌呤嘧啶核酸內切酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml

MAP3K2/MEKK2  絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy3  Cy3標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1mlCDC3/CDC10/Septin 7  細胞周期調控因子3抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD1A  T淋巴細胞CD1A抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER3 (Tyr1197)  磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-Chicken IgG/APC  APC標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

CHPT1  甘油二酯膽堿磷酸轉移酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

實驗事項：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。