純化抗體的定性和定量
在純化抗體時需要控制好幾個指標,包括純度,含量及抗體的抗原結(jié)合活性。
純度 在實驗的任何階段,確定抗體溶液純度的zui簡單方法是取一部分樣本進行SDS-PAGE電泳。凝膠可用考馬斯亮藍染色(靈敏度為0.1—0.5ug/帶)或銀染(靈敏度1~l0ug/帶)。
定量 如果抗體還不純,有一個快捷的定量方法,即通過SDS-PAGE電泳分離出輕、重鏈,然后和已知的標準染色帶比較。如果需要分析許多樣本,用免疫測定法對抗體定量較容易。如果抗體是經(jīng)過純化的,可通過測蛋白總量代替上述兩種方法,包括附錄Ⅱ所述的方法。有一簡單的方法,即紫外吸收法??贵w的量可通過測280nm處的吸收值來測(10D大致相當于0.75mg/m1的純化抗體)。
抗原結(jié)合活性 一般說來,用本書建議使用的純化方法不會引起抗原結(jié)合活性的改變。用蛋白G或蛋白A樹脂很少導致抗體活性喪失。然而,如果終抗體產(chǎn)物的作用不如原來所預料的好,檢測抗體純化過程所丟失的活性就極為重要。用一系列滴定法比較純化的抗體和其原材料的活性,以標定每一步中的總抗體量,這將有助于較好的估計通過純化所丟失的活性。
Anti-CA125 (Ovarian cancer antigen) 卵巢癌抗原抗體
Anti-CA15-3 乳腺癌相關(guān)抗原抗體
Anti-CAD/CPAN(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體
Anti-Casein(bovine) 抗牛酪蛋白抗體
Anti-Calcineurin α /PP-2B alpha 1 蛋白磷酸酯酶-2B催化亞單位抗體
Anti-caldesmon 鈣介質(zhì)素抗體
Anti-Calpain 1 鈣蛋白酶抗體
Anti-Calpain 2 (Calcium activated neutral proteinase 2) 鈣激活的中性蛋白酶2抗體
Anti-CNN1(Calponin 1) 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體
Anti-CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體
Anti-phospho-CaMK2a(pThr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體
Anti-Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體
Anti-CaMK2b(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II beita) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗體