化學(xué)發(fā)光技術(shù)
放射免疫分析法有很高的靈敏度,但存在著放射性防護(hù)和同位素污染等問(wèn)題。近年來(lái),許多非放射性同位素標(biāo)記的免疫分析方法相繼出現(xiàn)。其中,在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)及抗原-抗體特異性識(shí)別基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一種新的非放射免疫分析技術(shù)--化學(xué)發(fā)光免疫分析法,由于這種方法具有靈敏度高,特異性強(qiáng),精密度好,線性范圍寬,儀器設(shè)備簡(jiǎn)單,試劑價(jià)格低廉,方法穩(wěn)定、快速等優(yōu)點(diǎn),已成為一種重要的非同位素標(biāo)記免疫學(xué)檢測(cè)方法。
把化學(xué)發(fā)光物質(zhì)與免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合起來(lái),用光反應(yīng)表現(xiàn)被測(cè)的免疫成分濃度,即把高靈敏的光反應(yīng)與特異性的免疫學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法,稱為化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)。
化學(xué)發(fā)光技術(shù)是將發(fā)光物質(zhì)(如吖啶酯、魯米諾等)標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng),發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑(如過(guò)氧化陰離子)激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體,當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子,用自動(dòng)發(fā)光分析儀接收光信號(hào),測(cè)定光子產(chǎn)量,以反映待檢樣品中抗體或抗原含量?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法的檢測(cè)靈敏度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于ELISA、熒光免疫等,而優(yōu)于或與同位素檢測(cè)相當(dāng);在使用方便性上,化學(xué)發(fā)光與傳統(tǒng)ELISA方法一樣簡(jiǎn)單易用;在對(duì)人體和環(huán)境的危害上,化學(xué)發(fā)光對(duì)此沒(méi)有任何擔(dān)憂。
目前,越來(lái)越多的免疫檢測(cè)項(xiàng)目通過(guò)化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)來(lái)進(jìn)行,以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的ELISA和放射免疫分析法。
化學(xué)發(fā)光免疫分析包括三大類型:標(biāo)記化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的化學(xué)發(fā)光免疫分析、標(biāo)記熒光物質(zhì)的熒光化學(xué)發(fā)光免疫分析和標(biāo)記酶的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析。
zui近的一些分子生物學(xué)進(jìn)展使得一些生物技術(shù)工具極大提高了生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)和快速應(yīng)用。生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光(BL/CL)的主要特點(diǎn)就在于發(fā)光信號(hào)的高度可測(cè)性,可以用PMT(光電倍增管)和CCD成像系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)極少量的光子信號(hào)。BL是屬于CL范疇之內(nèi),CL反應(yīng)的特點(diǎn)是高光子產(chǎn)生效率,BL為0.5~0.8,CL為0.1-0.001。因此BL/CL的檢測(cè)極限可以達(dá)到10-21~10-18mol,這顯然要比其他的光學(xué)技術(shù)強(qiáng)得多。BL/CL已經(jīng)廣泛的應(yīng)用到免疫檢測(cè)中進(jìn)行標(biāo)記物的超靈敏檢測(cè)。
CL免疫檢測(cè)不但可以通過(guò)以CL分子直接標(biāo)記抗原或抗體,也可以以CL底物標(biāo)記可被檢測(cè)的酶。相比同位素檢測(cè),CL檢測(cè)以其更加靈敏和可檢測(cè)性獲得越來(lái)越多的應(yīng)用。