1.食品安全檢測(cè)ELISA試劑盒的操作原理：

ELISA的操作步驟：樣品收集保存、試劑準(zhǔn)備、溫育、洗板、顯色、比色、包被、加樣、加酶標(biāo)抗體、終止反應(yīng)、結(jié)果判定、

2．影響因素：

   分子量、穩(wěn)定性、純化、包被濃度，抗體純度和產(chǎn)品質(zhì)量

盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單，但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多，分布在測(cè)定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問(wèn)題的可能原因，特對(duì)常見(jiàn)問(wèn)題及原因歸納總結(jié)于下表。

臨床ELISA測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及可能的原因

問(wèn)題可能的原因（非試劑盒本身的原因）

1．弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本檢測(cè)不出 溫育的時(shí)間或溫度不夠；顯色反應(yīng)時(shí)間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問(wèn)題

2．測(cè)定的重復(fù)性差 （相同樣本兩次測(cè)定結(jié)果不一致） 這是典型的由測(cè)定操作引起的問(wèn)題，包括

（1）加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不一致；

（2）加樣過(guò)快，孔間發(fā)生污染；

（3）加錯(cuò)樣本；

（4）加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區(qū)；

（5）不同批號(hào)試劑盒中組分混用；

（6）溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致；

（7）孔內(nèi)污染雜物；

（8）酶標(biāo)儀濾光片不正確；

（9）血清標(biāo)本未*凝固即加入，反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細(xì)胞，易出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)等。

3．白板

（陽(yáng)性對(duì)照不顯色） （1）漏加酶結(jié)合物；

（2）洗板液配制中出現(xiàn)問(wèn)題，如量筒不干凈，含酶抑制物（如疊氮鈉）等。

（3）漏加顯色劑A或B；

（4）終止劑當(dāng)顯色劑使用。

4．全部板孔均有顯色 （1）洗板不干凈；

（2）顯色液變質(zhì)；

（3）加底物的吸光受酶污染；

（4）洗板液受酶等污染。