競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其原理：將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。其操作步驟為：

1. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

3. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。

4. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

5. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。